Regulación celular por protein fosfatasa 1
Aproximadamente 1/3 de todas las proteínas celulares se encuentran fosforiladas y hasta un 2% de todos los genes codifican protein quinasas o fosfatasas. Mientras que el papel y propiedades de muchas protein quinasas ha sido estudiado intensamente el modo de acción y funciones de las protein fosfatasas es menos conocido.
La proteína fosfatasa 1 (PP-1) es una serina/treonina proteína fosfatasa que regula una gran variedad de procesos biológicos como el ciclo celular, la diferenciación o la señalización celular. Los genomas de mamíferos contienen 3 genes que codifican 4 isoformas : PP1alfa, PP1beta, PP1gamma 1 y PP1gamma 2. Todas estas isoformas poseen un núcleo catalítico y especificidad de sustrato casi idénticas pero interaccionan in vivo con una gran diversidad de proteínas dando lugar a holoenzimas con funciones biológicas y propiedades diferentes .
Para identificar nuevos proteínas reguladoras de PP1, se han empleado diferentes aproximaciones experimentales. Un buen número de subunidades reguladoras se han identificado por rastreo de genotecas por el método de los dos híbridos. Utilizando este método hemos aislado e identificado una nueva subunidad reguladora que se ha denominado SIPP1(por splicing factor que interacciona con PQBP1 y PP1) . Se trata de una proteína modular de 641 aminoácidos en la que se puede identificar una señal bipartita de localización nuclear (NLS), una región coiled-coil, dos regiones ricas en prolina y una región rica en residuos de ácido aspar tico
Varias líneas de evidencia sugieren que SIPP1 es un activador del splicing de pre-mRNA. Así, SIPP1 interacciona con RNA y se localiza en los speckles nucleares que funcionan como depósito de factores de splicing . Mas recientemente, SIPP1 ha sido identificado por espectrometria de masas como un componente de los spliceosomas los complejos de proteína nuclear y RNA,que catalizan el splicing de pre-mRNA. Utilizando un sistema reportero de splicing hemos encontrado que derivados de SIPP truncados inhiben el proceso de splicing. La funcion precisa de SIPP1 y PP1 en el proceso de splicing es todavía desconocida.
Otro de los objetivos de nuestro trabajo es un mejor conocimiento de la función de SIPP1 y de su asociación con PP1 y para ello nos hemos enfocado en los ligandos de SIPP1. Asi uno de los aspectos estudiados es la interacción con la proteina Npw40/PQBP1 otra proteina nuclear con la que colocaliza en orgánulos nucleares de función desconocida. PQBP1 contiene un dominio WW por el que interacciona con otras proteinas como la subunidad mayor de RNA pol II. Asimismo el dominio central de PQBP1 contiene repeticiones de aminoácidos que se unen a extensiones de poli glutamina presentes en el factor de transcripción Brn2, la proteína Hungtintina y la proteina ataxina-1. Estas repeticiones de poli-glutamina se encuentran amplificadas en mutaciones ligadas a enfermedades neurodegenerativas y en particular se las considera responsables de la acumulación de proteína mutada característica de la ataxia espinocerebelar 1 (SCA-1) o de la enfermedad de Huntington. Se han descrito asimismo mutaciones de PQBP-1 en casos de enfermedad mental ligado al cromosoma X (XLMR)
Nuestro objetivo es estudiar el significado funcional de las interacciones de SIPP1 y su posible papel en las enfermedades citadas